泡菜废水处理
- 高盐废水是指盐度（以 ＮａＣｌ计）至少为10％（质量分数）的废水，主要包括含盐工业废水、含盐生活污水和其他含盐废水。四川泡菜是具有地方特色的发酵蔬菜制品，泡制泡菜后的高盐废水通常盐度达到5.0％左右，其中含有大量的嗜盐菌。
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高盐废水是指盐度（以 ＮａＣｌ计）至少为10％（质量分数）的废水，主要包括含盐工业废水、含盐生活污水和其他含盐废水。四川泡菜是具有地方特色的发酵蔬菜制品，泡制泡菜后的高盐废水通常盐度达到5.0％左右，其中含有大量的嗜盐菌。由于嗜盐菌具有特殊的结构和理化性质，能抵抗高盐浓度环境胁迫，不易污染，可减少发酵工艺，降低成本，因此常用于发酵生产。嗜盐菌种类繁多，它们的分类主要依据三个方面：表型特征、化学分类数据和分子生物学数据。
嗜盐菌的分离和菌体的培养
将冷冻保藏的高盐废水置于培养箱中解冻活化，取0.1ｍＬ到ＥＰ管中，再加入0.9ｍＬ已灭菌的蒸馏水，用漩涡振荡器混合均匀。从中取200μＬ均匀涂布于ＬＢ培养基（其中 ＮａＣｌ浓度为１５％ ）上，37℃倒置培养48ｈ。从长出的菌中挑选20株长势较好的菌株转接到新的LB培养基上，并对每一株菌进行编号。
再对每株菌进行反复划线，直到得到单菌落。后将分离得到的菌划线于保藏管中保藏待用。配制液体ＬＢ培养基300ｍＬ，分别置于３个三角瓶中，选取３株长势较好，差异较大的菌分别接种于３个三角瓶中，并作好标记，于37℃，200ｒ／ｍｉｎ摇床培养,17ｈ 。
16ＳｒＤＮＡ序列及系统发育分析
基因组ＤＮＡ的提取和１６ＳｒＤＮＡ的扩增及序列分析参见Ｔｏｒｕ Ｓｈｉｇｅｍａｔｓｕ等方法。引物采用细菌１６ＳｒＤＮＡ ＰＣＲ 扩 增 通 用 引 物 Ｅｕ２７Ｆ （ ５′ － ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ － ３′ ， １０ μ Ｍ ）和原核微生物特异引物 １４９０Ｒ（５′ － ＧＧＴＴＡＣＣＴＴＧＴ ＴＡＣＧＡＣＴＴ － ３′ ， １０ μ Ｍ ）。ＰＣＲ扩增条件：９４℃ 变性 １ｍｉｎ ， ５０℃ 退火 １．５ｍｉｎ ， ７２℃ 延伸２ｍｉｎ ， ３０ 个循环。 ＰＣＲ 产物经 ｐＧＥＭ － Ｔ 载体 Ｔ － Ａ 克隆入 Ｅ ． ｃｏｌｉ ＤＨ ５α ，挑选阳性菌落，提取重组质粒。将质粒送 ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ 公司进行序列测定，并将测得的序列去载体后提交到 ＮＣＢＩ进行比对，将所测序结果与数据库中已知序列在ＧｅｎＢａｎｋ 数据库中比对，获得与实验菌株相似的典型菌株 １６ＳｒＤＮＡ 序列，选取序列用 Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ 和ＭＥＧＥ ４．０绘制系统发育树，对所构建的系统发育树评估。
三、结果
1.嗜盐菌的分离结果
划线分离后得到的单菌落和终分离得到的２０株单菌。由图1，图2可知，分离得到的这２０株单菌株有一定的耐盐性，能在含盐量为１５％的 ＬＢ培养基上生长；嗜盐菌菌落部分为白色，部分为黄色，扁平，表面光滑，湿润，直径在１～２ｍｍ 左右。挑选出差别较大菌株分别命名为 ＭＳ１ 、 ＭＳ２ 、 ＭＳ３ 。
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